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    常見問題解答

    PCR實驗室設計的基本原則

    作者:歐貝爾實驗室 日期:2023/10/20 21:07:16 人氣:6

      PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等,今天為大家進行詳解PCR實驗室設計的基本原則。

      一、PCR實驗室布局設計

      PCR實驗室原則上為試劑準備區,樣品制備區,擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域,并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區,即從:試劑準備區一樣品制備區一PCR擴增室一產物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20m一支40W的紫外燈。

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      二、實驗室功能區設計及主要設備

      1.試劑準備區:主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平,冰箱,離心機,加樣器,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求,一般為+10Pa。

      2.樣品制備區:主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染,一般為+10Pa.

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      3.擴增區:主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來.自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:擴增儀,冰箱,離心機,加樣器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶從本區漏出一般為一25Pa。

      4.擴增產物分析區:擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀,洗板機、加樣器和水浴箱等。本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,一般為一25Pa,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。

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